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高速離心機分離植物細胞膜的方法

發布時間:2015-5-13 17:42:11??????點擊:
化學實驗室離心機選用盧湘儀H2050臺式高速大容量離心機進行實驗。我給你一種用藥品比較少的。你結合自己的情況看一下。
 另這種方法得到的質膜多數是微囊泡。
 這種方法我們成功提取過擬南芥,玉米胚芽鞘,煙草懸浮細胞的質膜。
 1,組織破碎,你可以用研本。如果存在大量粗纖維的話,你還可以用紗布過濾一下。
      裂解液配方,0.55M 蔗糖;0.76M Tris; 0.02M EDTA; 0.03M 抗壞血酸。用Hcl 調整HP 到7.8。
      原料/裂解液 1:2
 2, 研磨液 分3次低速離心分離出那些不需要的組織殘渣或細胞器。 100G 10min ; 3000G 5min ; 17000G 15min。(速度不夠的話適當延長時間,否則懸浮液中會存在大量的線粒體之類的細胞器)。
 3, 上一步得到的懸浮液是含有總膜的懸浮液,一般情況下, 下一步應該利用高速離心20000G以上的離心力,把所有的膜沉淀出來進一步純化(這里你最好找個高速離心機,推薦選用H2050臺式高速大容量離心機,離心力如果不夠分離不出來,如果原料非常多的話可能會析出一些,你也可以試著改變下裂解液的蔗糖濃度,理論上密度變了以后沉降系數也會改變,不過這個要做大量的計算工作以確保不影響膜的純度)。純化有PEG/Dextran; 蔗糖梯度兩種方法, 蔗糖梯度比較老了,效果不是很好,但是蔗糖很便宜很好弄。我們用的是6.3%PEG/Dextran 。
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